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本试剂盒采用探针法多重实时荧光RT-PCR方法检测猪全血、血清、淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体、排泄物、口鼻拭子及细胞培养物等样品中非洲猪瘟病毒（ASFV）的DNA、猪瘟病毒（CSFV）的RNA、猪伪狂犬病毒（PRV）的DNA，适用于非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒的检测。AD-011-0为普通探针法检测试剂盒；AD-011-1为防污染体系检测试剂盒，添加dUTP和UNG酶可有效减少气溶胶等的污染，降低假阳性风险。
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组成 |
100头份 |
贮藏条件 |
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反转录酶混合液 |
110 µL |
-20℃ |
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阴性对照（无核酸酶水） |
1 mL |
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阳性对照 |
20 µL |
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PCR 反应液 |
900 µL |
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荧光探针 |
650 μL |
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说明书 |
1 份 |
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试剂 |
体系 |
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无菌无核酸酶水 |
3×（N+1）µL |
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反转录酶混合液 |
1×（N+1）µL |
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PCR 反应液 |
8×（N+1）µL |
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引物、荧光探针混合液 |
6×（N+1）µL |
将以上配制的反应体系充分混匀后，分装每个反应管中各18 µL。
取2 µL 模板DNA/RNA，加入相应反应管中，混匀并作好标记。在荧光PCR 扩增仪上进行以下反应：反转录50 ℃ 5 min，预变性95 ℃ 2 min；循环 95 ℃ 10 s，58 ℃ 35 s，共40 次，每次循环的第二步（58 ℃ 35 s）收集荧光信号（报告基团“FAM、HEX、Cy5”，淬灭基团“None”）。防污染体系在反转录步骤（50 ℃ 5 min）之前进行消化步骤25 ℃ 5 min。
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