本试剂盒采用探针法单重实时荧光RT-PCR方法检测猪血清、淋巴结、脾脏、肺脏、扁桃体、肺灌洗液、口腔拭子及细胞培养物等样品中猪蓝耳病毒(即猪繁殖与呼吸综合征病毒,PRRSV)的RNA,适用于猪蓝耳病毒的检测。AD-004-0为普通探针法;AD-004-1为防污染体系,添加dUTP和温度敏感型UNG酶可有效减少气溶胶等的污染,降低假阳性风险。
组成 | 100头份 | 贮藏条件 |
反转录酶混合液 | 110 µL | -20℃ |
阴性对照(无核酸酶水) | 1 mL | |
阳性对照 | 20 µL | |
PCR 反应液 | 900 µL | |
荧光探针 | 220 μL | |
说明书 | 1 份 |
试剂 |
体系 |
无菌无核酸酶水 |
7×(N+1)µL |
反转录酶混合液 |
1×(N+1)µL |
PCR 反应液 |
8×(N+1)µL |
引物、荧光探针混合液 |
2×(N+1)µL |
将以上配制的反应体系充分混匀后,分装每个反应管中各18 µL。
分别取2 µL 模板DNA,加入相应反应管中,混匀并作好标记。在荧光PCR 扩增仪上进行以下反应:反转录50 ℃ 5 min,预变性95 ℃ 2 min,循环 95 ℃ 10 s,60 ℃ 35 s,共40 次,每次循环的第二步(60 ℃ 35 s)收集荧光信号(报告基团“ROX”,淬灭基团“None”)。防污染体系在反转录步骤(50 ℃ 5 min)之前加入消化步骤25 ℃ 5 min。
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