本试剂盒采用探针法单重实时荧光PCR方法检测猪全血、血清、精液、大脑海马背侧皮层、中脑、脑桥、三叉神经节、肺脏、淋巴结、鼻拭子及细胞培养物等样品中猪伪狂犬病毒(PRV)的DNA,适用于猪伪狂犬流行病毒的检测。AD-003-0为普通探针法检测试剂盒;AD-003-1为防污染体系检测试剂盒,添加dUTP和UNG酶可有效减少气溶胶等的污染,降低假阳性风险。
组成 |
100头份 |
贮藏条件 |
阴性对照(无核酸酶水) |
1 mL |
-20℃ |
阳性对照 |
20 µL |
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PCR 反应液 |
900 µL |
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荧光探针 |
220 μL |
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说明书 |
1 份 |
试剂 |
体系 |
无菌无核酸酶水 |
8×(N+1)µL |
PCR 反应液 |
8×(N+1)µL |
引物、荧光探针混合液 |
2×(N+1)µL |
将以上配制的反应体系充分混匀后,分装每个反应管中各18 µL。
分别取2 µL 模板DNA,加入相应反应管中,混匀并作好标记。在荧光PCR 扩增仪上进行以下反应:95 ℃ 2 min;循环 95 ℃ 10 s,60 ℃ 35 s,共40 次,每次循环的第二步(60℃ 35 s)收集荧光信号(报告基团“Cy5”,淬灭基团“None”)。防污染体系在预变性步骤(95 ℃ 2 min)之前进行消化步骤50 ℃ 5 min。
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