本试剂盒采用探针法双重实时荧光PCR方法检测猪源基因组DNA。根据猪线粒体DNA上的cytb基因的特异片段设计引物及探针，应用两种不同荧光探针染料在同一反应管内进行目的基因和内参基因的双重检测。本试剂盒猪源特异引物和探针在猪的同源区域进行设计，常规养殖的猪种均可以检出，但根据猪的品种不同，目标序列可能有所差异，因此某些品种的猪存在漏检风险。

按下表配制PCR反应体系。

*：阳性对照使用试剂配套阳性对照作为模板DNA添加，阴性对照使用ddH₂O即可。

将以上配制的反应体系充分混匀后， 瞬时离心使试剂回到管底，在荧光PCR 扩增仪上进行以下反应：95 ℃ 10s；循环 95 ℃ 5s，60 ℃ 30s，共40 次，每次循环的第二步（60℃ 30s）收集荧光信号（报告基团“猪源基因-FAM、内质控-HEX”，淬灭基团“None”,使用ABI 7500仪器时，由于无HEX通道建议用VIC通道代替，退火时间设置为31s）。