本试剂盒采用探针法双重实时荧光PCR方法检测羊源基因组DNA。根据羊线粒体DNA上的cytb基因的特异片段设计引物及探针，应用两种不同荧光探针染料在同一反应管内进行目的基因和内参基因的双重检测。本试剂盒羊源特异引物和探针在绵羊和山羊等的同源区域进行设计，绵羊和山羊等均可以检测，但检测品种不同，目标序列可能有所差异，因此某些品种的羊可能无法检出。
【试剂盒组成】
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组成 |
25μl反应×50次 |
贮藏条件 |
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阴性对照（ddH2O） |
1 mL |
-20℃ |
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羊源阳性对照-E7 copies/μL（PTC） |
20 µL |
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2×Probe PCR PreMix for Ovine |
700 µL |
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羊源引物、探针、内质控Mix（引物Mix） |
110 μL |
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说明书 |
1 份 |
按下表配制PCR反应体系。
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试剂 |
添加量（每25μL体系） |
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2×Probe PCR PreMix for Ovine |
12.5 µL |
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引物Mix |
2 μL |
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模板DNA* |
1 μL |
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ddH2O |
9.5 µL |
*：阳性对照使用试剂配套阳性对照作为模板DNA添加，阴性对照使用ddH2O即可。
将以上配制的反应体系充分混匀后， 瞬时离心使试剂回到管底，在荧光PCR 扩增仪上进行以下反应：95 ℃ 10s；循环 95 ℃ 5s，60 ℃ 30s，共40 次，每次循环的第二步（60℃ 30s）收集荧光信号（报告基团“羊源基因-FAM、内质控-HEX”，淬灭基团“None”,使用ABI 7500仪器时，由于无HEX通道建议用VIC通道代替，退火时间设置为31 s）。
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