本试剂盒根据犬瘟热病毒（CDV）、犬副流感病毒(CPIV)的基因特异片段分别设计引物及荧光探针（CPIV-FAM、CDV-Cy5）,同时在犬基因特异片段上设计內质控引物及HEX荧光探针，以样品核酸作为模板，在同一反应管内进行两种目的基因和内质控基因的多重RT-PCR检测。扩增试剂中添加dUTP和温度敏感型UNG酶可有效减少气溶胶等的污染，降低假阳性风险。
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组成 |
100头份 |
贮藏条件 |
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阴性对照（ddH2O） |
1 mL |
-20℃ |
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阳性对照（PTC） |
20 µL |
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20×反转录酶混合液（酶Mix） |
110 µL |
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2.5×qPCR 反应液（qMix） |
850 µL |
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2.5×引物及探针混合液*1（引物Mix） |
850 μL |
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说明书 |
1 份 |
*1：该引物及探针混合液中包括犬瘟热病毒（CDV）、犬副流感病毒(CPIV)和犬源内质控的引物、探针等，该混合液使用及保存时请尽量避光。
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试剂 |
体系 |
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20×反转录酶混合液 |
1×（N+1）µL |
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2.5×qPCR 反应液 |
8×（N+1）µL |
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2.5×引物及探针混合液 |
8×（N+1）µL |
§ 将以上配制的反应体系充分混匀后，分装每个反应管中各17 µL。取3 µL 模板RNA，加入相应反应管中，混匀并作好标记。
§ 在荧光PCR 扩增仪上进行以下反应：UNG酶消化25 ℃ 5 min，反转录55 ℃ 5 min，预变性95 ℃ 2 min；循环 95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，共40 次，每次循环的第二步（60 ℃ 30 s）收集荧光信号（报告基团“CPIV-FAM、IC-HEX、CDV-Cy5”，淬灭基团“None”）。
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